相关制度
常用表格
专家会诊  
   
 
相关制度
临床病理操作规范(二)--病理科技技术操作规范
来源:本站整理  发布时间:2010/10/14 14:17:59

经典的病理学是一门形态学学科,侧重研究疾病时机体的结构性变化(病变,Lesion),即组织、细胞的形态变化。除了肉眼观察外,借助显微镜是建立病理学诊断的核心环节,而显微镜观察的客体是切片中的形态。大量事实证明:厚薄适宜、染(显)色良好的切片,是建立正确病理诊断的前提和保证;相反,质量很差的切片或使病理诊断无法进行,或导致误诊。而切片质量取决于四大因素:第一,技术人员的敬业态度;第二,技术操作的规范化程度;第三,技术水平;第四,设备状况。为此,应提倡奉献、严谨、求精的精神和作风,并主动反映情况,争取领导支持,改善基本设备条件。

六、      固定

(一)                               固定的概念

应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定(fixation)。

病理标本(样本)离体后,由于微环境的变化将发生自溶和(或)腐败,使其结构破坏。固定的目的和机制是:①使蛋白质凝固,终止或减少分解酶的作用,防止自溶,保存组织、细胞的离体前结构状态,包括保存组织或细胞的抗原性,使抗原不失活,不发生弥散。②保存组织、细胞内的蛋白质、脂肪、糖原、某些维生素及病理性蓄积物,维持病变的特异性特征。③使上述物质转为不溶解状态,防止和尽量减少制片过程中人为的溶解和丢失。④起助染作用。

固定方法有:①物理学方法,如低温冷冻,干冰(dry ice,即固态无水碳酸)冰冻真空脱水,石蜡渗入法。②化学方法,采用各种化学溶液作固定液,使组织细胞进入固定状态。这是国内最常用的方法。

固定应在标本离体后尽快进行,小标本可在取材后直接放入固定液内,大标本应在手术结束前或结束后迅速放入固定液内。固定液与标本的比例不得少于标本体积得5倍。有特殊要求者应事先选定相应得固定液,如欲查糖原,应选择无水乙醇作固定液等。固定得时间应适当,微小标本(如胃粘膜等)24h即可,大标本应置放1224h,但亦不要过久,以免影响抗原性,造成免疫组化操作中得困难。

(二)  用固定液及其配制

固定液分单纯固定液和混合固定液。

1甲醛(formaldehyde

   是无色气体,易溶于水成为甲醛溶液。易挥发,且有强烈刺激气味,常用得是37%~40%得甲醛溶液,商品名为福尔马林(formalin)。用作固定的浓度习惯为10%福尔马林(即1份甲醛溶液加9份水配制而成),实际含甲醛4%。

10%福尔马林渗透力强,固定均匀,对组织收缩少。对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好,是最常用的固定剂。

经福尔马林固定时间长的组织,易产生黑色的沉淀,称福尔马林色素。

2 乙醇

无色液体,易溶于水,它除可作为固定剂外,还可作为脱水剂,对组织有硬化作用。固定用一般 80%~95%浓度,乙醇渗透力校弱,它能溶解脂肪,核蛋白被沉淀后,仍能溶于水,因此核的着色不良。

3 中性甲醛液(混合固定液)

甲醛(浓)120ml,加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O4g,磷酸氢二纳(Na2HPO413g。此液固定效果比单纯10%福尔马林要好。

4 AF液(混合固定液)

95%乙醇90ml,甲醛()10ml。也有配方是95%乙醇85ml,甲醛(浓)10ml,冰醋酸5ml

此液除有固定作用外,兼有脱水作用,因此,固定后可直接入95%乙醇脱水。

以上4种固定液中,以中性甲醛为首选,其次为10%福尔马林,乙醇应尽量不用。

七、      常规石蜡切片操作

(一)  组织洗涤

经过固定的组织一般都要洗涤(washing),其目的是清除组织内外残留的固定剂,以免影响脱水等后续过程;防止有些固定剂在组织中发生沉淀或结晶而影响观察。洗涤时最好是从容器的底部入水,再从容器上面缓慢流出,这样2h即可,若为陈旧标本则需24h

(二)  组织脱水

1概念

为保证石蜡有可能进入组织内部,采用适当方法,将已固定和水洗过的组织中的水分彻底驱除的过程称为脱水(dehydration)。脱水剂必须是与水在任何比例均能混合的液体。最常用的脱水剂为乙醇,其它尚有正丁醇和二氧已环以及丙酮等。

2浓度与时间

脱水用的乙醇浓度一般从70~75%开始,然后依次80→95→100%,即由低浓度逐步到高浓度。脱水的时间与组织大小、厚薄有很大关系、组织厚大,脱水时间要长些;而小薄的组织脱水时间相对的可以短些。组织脱水时间在低浓度乙醇中可以长些(如70~80%),而在高浓度乙醇中要短些,这是因为高浓度的乙醇渗透力不强,延长脱水时间无益,相反高浓度乙易使组织收缩、变脆,致使以后切片和观察困难。

(三)  组织透明

采用既能与脱水剂(如乙醇)混合,并使之被提去(dealcoholisation),又能作为石蜡溶媒的诱导剂,使石蜡真正渗入组织中的过程称为媒介(intermediary)。由于常用的透明剂(如二甲苯)作用之后,其折射指数与组织蛋白折射指数接近,组织显示出半透明状态,因此,通常又称此过程为透明(clearing)。但并非所有媒介过程均使组织透明。

常用的透明剂为二甲苯,它易使组织收缩、变脆,故透明时间不宜长,一般1..5~2h,二节(即换2次,下同),最好是肉眼观察,见组织呈棕黄色或暗红色透明状(象琥珀样)即可。

(四)  组织浸蜡

组织经媒介(透明)处理后,置入熔化的石蜡内浸渍,使石蜡分子浸透入组织中的过程称浸蜡或石蜡渗透(infiltrating)。渗透的过程也可用火棉胶代替石蜡,称为浸胶。但其透明过程应作相应更动。

浸蜡一般分2~3节,总共4~24h,浸蜡时间过短,蜡没有完全渗入组织中,组织过软,切片困难;浸蜡时间过长,造成组织硬脆,切片也困难。

(五)  组织包埋

把浸蜡的组织包在蜡里成块,使之有一定的硬度和韧度,便于在切片机上夹持切片,称之为包埋(embedding)。

1注意事项

1    包埋框要比组织块大,这样保证包成的蜡块组织四周都有蜡边。

2    胃、肠、胆囊等组织,应将能看到组织学各个层面的一面作为切面。其它组织应将切面朝下。

3    包埋蜡冬季用低熔点(56~58),夏秋季用高熔点蜡(60~62)。

4    包埋蜡最好是经多次熔化、沉淀过的蜡,这样的蜡干净、致密,利于切片。

2脱水机脱水、透明、浸蜡时间

70%乙醇1h

80%乙醇1h

95%乙醇Ⅰ1h

95%乙醇Ⅱ1h

95%乙醇Ⅲ1h

100%乙醇Ⅰ1h

100%乙醇Ⅱ1h

⑻二甲苯Ⅰ30min

⑼二甲苯Ⅱ1h

⑽浸蜡Ⅰ1h

⑾浸蜡Ⅱ1h

⑿浸蜡Ⅲ2h以上。

3手工组织脱水、透明、浸蜡时间

[1] [2] [3]  下一页

[打 印]
  版权所有:第四军医大学病理病生教研室 陕ICP备06008626号 技术支持:奈特星网络公司
咨询电话:029-84775497 029-84773445 地址:陕西省西安市长乐西路169号